产品简介
重组型 TEV 蛋白酶（ rTEV）是经过基因工程改造和纯化后的重组蛋白酶 ，不仅保持天然 TEV 酶的功能活性 ，且在广谱的温度范围内表现出更强的稳定性和特异性。rTEV 是一种用来切除融合蛋白上亲和标签的常用工具酶，具有很强的位点特异性，严格识别七氨基酸序列 EXXYXQ ↓ (G/S) ，切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸/丝氨酸之间。普遍应用的七氨基酸序列为 ： Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln ↓-Gly。rTEV 在 pH 7.0 ，30℃时可达到最佳活性 ，但在 pH 6.0-8.5 和温度 4-30℃的广泛范围内皆有活性（见表 1），使得反应条件的选择可根据目的蛋白的情况而灵活变动。另外 rTEV 切割后也能利用其 N 端的 6×His标签 ，通过 Ni-NTA 树脂去除 ，以达到纯化目的蛋白的目的。
该产品在 20403ES 基础上进行了工艺优化，与 20403ES 相比，其纯度更高、活性更强、宿主 gDNA 残留更低，适用于对酶纯度、活性和残留要求更高的应用场景。
产品信息
货号 | 20427ES80 / 20427ES10 / 20427ES50 |
规格 | 1 KU / 10 KU / 50 KU |
酶活 | 5 U/μL |
酶活定义 | 在 1×rTEV Buffer（50 mM Tris ，pH 8.0，0.1 mM EDTA，1 mM DTT）中，30℃反应 1 h ，剪切>85%的 3 μg 底物所需要的酶量定义为一个活性单位 |
蛋白纯度 | ≥95% |
来源 | 大肠杆菌表达 |
组分信息
组分编号 | 组分名称 | 20427ES80 | 20427ES10 | 20427ES50 |
20427-A | rTEV Protease (5 U/μL) | 200 μL | 2×1 mL | 10 mL |
20427-B | rTEV Buffer (10×) | 600 μL | 6 mL | 30 mL |
储存条件
rTEV Protease ，-25~-15℃保存 ，有效期 6 个月；-85~-65℃保存 ，有效期 1 年。 rTEV Buffer ，-25~-15℃保存 ，有效期 1 年。
注：建议收到货或者第一次使用时分装各组分保存 ，避免反复冻融。
用说明
1. 在 EP 管中配制如下反应体系：
组分 | 用量 |
融合蛋白 | 40 μg |
rTEV Protease (5 U/μL) | 4 μL |
rTEV buffer (10×) | 10 μL |
2. 30℃孵育2h或4℃过夜。
反应时间（h） | 不同温度下剪切活性（%） | |||
4℃ | 16℃ | 21℃ | 30℃ | |
1 | 34 | 58 | 56 | 85 |
2 | 58 | 80 | 78 | 90 |
3 | 71 | 99 | 99 | 99 |
3.5 | 84 | 99 | 99 | 99 |
注意事项
1. 影响天然 TEV 酶活性的常见因素：
1） PMSF 和 AEBSF（1 mM），TLCK（1 mM） ，Bestatin（1 mg/mL），EDTA（1 mM） ，Pestatin A（1 mM）以及 E-64 （3 mg/mL） ，而 20427ES 可兼容上述抑制剂；
2）Zn2+离子浓度（>5 mM） ，同样对 20427ES 活性有抑制；
3）与半胱氨酸反应的试剂 ，也是 20427ES 的潜在抑制剂。
2. 为了您的安全和健康 ，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3. 本产品仅作科研用途！